CADERNO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS

Agrarian Sciences Journal

Análise da presença da atividade da enzima alfa-amilase salivar em cães

Anne Karoline Mendes da Silva

*; Natan Dias de Oliveira

; Elber Gomes Sousa

; Valéria Magro Octaviano

Bernis

; Walter Octaviano Bernis Filho

DOI: https://doi.org/10.35699/2447-6218.2020.25948

Resumo

A alfa-amilase salivar é uma enzima unida ao cálcio que inicia a digestão de carboidratos tanto na cavidade oral

como no vestíbulo da boca. Em animais, a alfa-amilase é secretada pelo tecido pancreático de todos os vertebrados e

pela glândula salivar de alguns, entretanto, estudos sobre a presença da atividade da alfa-amilase na saliva de cães

são escassos e contraditórios entre literaturas. Diante isso, o objetivo dessa pesquisa foi identiﬁcar a presença da

atividade da enzima alfa-amilase salivar em cães. O protocolo usado para a determinação da enzima foi o descrito no

kit colorimétrico especíﬁco e adaptado, sendo utilizado como base o método colorimétrico. Nesta metodologia, foi

utilizado um kit de reagentes para determinação da atividade da amilase, onde a amostra de saliva foi incubada com

o substrato amido e aquecida em temperatura de 38,9°C, para simular a temperatura média do corpo de um cão. Pela

adição da solução iodada, o amido não hidrolisado adquire coloração azul que diminui proporcionalmente à atividade

enzimática, sendo comparado com um controle. Com os resultados obtidos dessa pesquisa, é possível concluir que,

ao realizar a análise laboratorial das amostras colhidas, foi possível observar que não há presença signiﬁcativa da

alfa-amilase na saliva de cães que seja capaz de hidrolisar o amido.

Palavras-chave: Amido. Atividade enzimática. Saliva.

Analysis of the presence of activity salivary alpha-amylase enzyme in dogs

Abstract

Alpha-amylase is an enzyme united to calcium that initiates the digestion of carbohydrates in the oral cavity as well

as in oral vestibule. In animals, alpha-amylase is secreted by the pancreatic tissue of all vertebrates and by the sali-

vary glands of some. However, it is observed that studies on the presence of alpha-amylase activity in the saliva of

dogs are scarce and contradictory between literatures. Accordingly, the aim of this investigation was to identify the

presence of alpha-amylase enzyme in dogs. The protocol used to determine the enzyme was described in the speciﬁc

colorimetric kit and adapted, being used as a basis the modiﬁed colorimetric. In this methodology, a reagent kit was

used to determine amylase activity, where the saliva sample was incubated with starch substrate and heated to a tem-

perature of 38,9°C, to simulate a dog›s average body temperature. By adding the iodine solution, the non-hydrolyzed

starch acquires a blue color that decreases proportionally to the enzymatic activity, being compared with a control.

With the results obtained from this research, it is possible to conclude that, when performing the laboratory analysis

Instituto Federal do Norte de Minas Gerais. Salinas, MG. Brasil.

https://orcid.org/0000-0002-9494-1500

Instituto Federal do Norte de Minas Gerais. Salinas, MG. Brasil.

https://orcid.org/0000-0001-5446-6744

Secretaria de Saúde, Setor de Vigilância Epidemiológica, Canil Municipal. Salinas, MG. Brasil.

https://orcid.org/0000-0003-1296-2904

Instituto Federal do Norte de Minas Gerais. Salinas, MG. Brasil.

https://orcid.org/0000-0001-8248-160X

Instituto Federal do Norte de Minas Gerais. Salinas, MG. Brasil.

https://orcid.org/0000-0001-6553-6808

*Autor para correspondência: annemendes300@gmail.com

Recebido para publicação em 22 de Outubro de 2020. Aceito para publicação 25 de Dezembro de 2020.

Silva, A. K. M. et al.

Cad. Ciênc. Agrá., v. 12, p. 01–05, https://doi.org/10.35699/2447-6218.2020.25948

of the samples collected, it was possible to observe that there is no signiﬁcant presence of alpha-amylase in the saliva

of dogs that is capable of hydrolyzing starch.

Keywords: Enzymatic activity. Saliva. Starch.

Introdução

Durante o processo de domesticação dos animais,

quando sua alimentação passou a ser controlada por ho-

mens, eles tiveram várias funções, desde fonte de alimento

próxima ao homem, proteção contra outros animais, caça

a pragas e atualmente considerados membros da família

(Ogoshi, et al. 2015).

Com essa proximidade, com o aumento de pro-

dução de rações no país e devido à melhora do poder

aquisitivo de proprietários, cães e gatos, passaram a obter

alimentos mais soﬁsticados do que os que eram oferecidos

anteriormente, havendo uma importante modiﬁcação na

sua alimentação nas últimas décadas. Com isso, estudos

referentes à digestão alavancaram, desde pesquisas re-

ferentes à ingestão de alimentos até a sua eliminação.

Dentre os nutrientes necessário que estão na

alimentação desses animais, podemos notar que os car-

boidratos estão presentes em grandes quantidades em

alimentos secos e semiúmidos para gatos e, principalmente

para cães, tornando-o o princípio nutricional em maior

quantidade na maioria dos alimentos secos para essas

espécies (NATIONAL RESEARCH COUNCIL, 2006).

Embora não seja um nutriente essencial, os car-

boidratos são bem utilizados e digeridos nessas espécies,

fornecendo uma fonte útil de energia e glicose. Na dieta

dos cães, a fonte energética com base nos carboidratos

pode reduzir a necessidade da proteína (Brown, 2009).

Sendo assim, é importante que haja um bom

aproveitamento dos carboidratos pelos animais, e, se-

gundo Moriel et al., (2010), o processo de quebra dessas

grandes moléculas se inicia na boca com a mastigação,

onde o acesso às enzimas salivares facilita sua digestão.

Dentre as enzimas estudadas no processo diges-

tivo dos carboidratos, podemos pontuar a alfa-amilase

salivar e a amilase pancreática. A alfa-amilase salivar, era

conhecida antigamente como ptialina e é uma enzima

que pode começar a clivar as ligações alfa-1,4 glicosí-

dicas entre as moléculas de glicose no amido (REECE,

2017), porém, observa-se em animais que estudos sobre

a presença da alfa-amilase na saliva de cães são escassos

e contrários entre literaturas.

Nos animais onívoros, como ratos e porcos é ci-

tada a presença dessa enzima que digere amido (KLEIN,

2014). Nos animais carnívoros, como cães e gatos é citada,

mas como ausente (Júnior; Lima; Saad, 2006). Existem

opiniões divergentes quanto a presença ou ausência da

enzima. Na citação de Reece (2017), descreve a presença

da enzima alfa-amilase na saliva de cães e gatos.

Diante dos questionamentos e divergências na

literatura sobre a presença da atividade da enzima alfa-a-

milase na saliva de cães, torna-se importante o desenvol

vimento de pesquisas que esclareçam essa dúvida. Dessa

forma, com os resultados desse trabalho, objetivou-se

identiﬁcar a presença da atividade da enzima alfa-amilase

salivar em cães, tornando este, um estudo com potencial

para o conhecimento futuro relacionado à digestão de

alguns animais monogástricos, como a melhora no balan-

ceamento e composição de rações incluindo carboidratos.

Material e métodos

Colheita de amostras:

Para este estudo foram analisadas amostras de

saliva oriundas de animais do Canil Municipal de Salinas-

-MG. O protocolo experimental desse trabalho foi apro-

vado pela Comissão de Ética na Utilização dos Animais

(CEUA) do Instituto Federal do Norte de Minas Gerais

sob o protocolo de número 07/2020.

Foram colhidas onze amostras de cães sem raça

deﬁnida, dos quais cinco eram machos e seis eram fêmeas.

Os animais recebiam diariamente ração comercial e água

à vontade. Foi realizada a correta contenção física dos

animais, e com o auxílio de luvas e swab (zaragatoa), as

amostras foram colhidas do vestíbulo da boca dos cães

(todas simultaneamente no período da manhã) (Figura

1). Fichas com as identiﬁcações do animal, sexo e tipo

de alimentação foram preenchidas (Tabela 1).

Em seguida, o swab foi inserido em microtubo

tipo Eppendorf (tubo de microcentrífuga) para depositar

a saliva. Os microtubos haviam sido anteriormente identi-

ﬁcados e colocados 2 mL de solução NaCl 0,9%. Os swabs

e luvas utilizadas foram descartados e todo o material

coletado foi acondicionado em caixa de isopor com gelo,

para serem conduzidos ao laboratório e armazenados em

congelador de geladeira e mantidos congelados (-10°C)

para posterior determinação da presença da atividade

da enzima alfa-amilase salivar.

Análise laboratorial:

As análises foram feitas 24 horas após a coleta,

sendo conduzidas em laboratório do Complexo de Aten-

dimento Clínico Veterinário do Instituto Federal do Norte

Análise da presença da atividade da enzima alfa-amilase salivar em cães

Cad. Ciênc. Agrá., v. 12, p. 01–05, https://doi.org/10.35699/2447-6218.2020.25948

de Minas Gerais (IFNMG) – Campus Salinas, localizado na

Fazenda Varginha, Rodovia MG-404, Km 02, Salinas-MG.

Os microtubos do tipo Eppendorf foram descongelados

em temperatura ambiente.

Figura 1 – Colheita de saliva através de swab (zaragatoa) no vestíbulo oral dos cães

Tabela 1 - Identiﬁcação dos animais que foram coletadas as amostras

Cão/amostra Identiﬁcação Sexo Alimentação

Baia 08-H Macho Ração comercial

Baia 16-P Fêmea Ração comercial

Baia 15-O Macho Ração comercial

Baia 15-O Fêmea Ração comercial

Baia 13-M Macho Ração comercial

C10

Baia 04-D Fêmea Ração comercial

C11

Baia 11-K Macho Ração comercial

O protocolo usado foi o descrito no kit colorimé-

trico especíﬁco (Amilase Colorimétrica K003, Bioclin,

Quibasa Química Básica Ltda

, Belo Horizonte, MG,

Brasil) e adaptado, sendo utilizado como base o método

colorimétrico modiﬁcado proposto por Caraway (1959),

onde a amostra de saliva é incubada com o substrato

amido (Reagente Nº 1) e aquecida em temperatura de

38,9°C, para simular a temperatura média do corpo de

um cão. Pela adição da solução iodada (Reagente Nº 2),

o amido ainda não hidrolisado, adquire coloração azul

que diminui proporcionalmente à atividade enzimática,

sendo comparado com um controle.

A saliva humana possui constante atividade da

enzima digestiva alfa-amilase (GUYTON; HALL, 2011).

Foi realizado um teste inicial com saliva humana, se-

guindo detalhadamente o método inicial, validando a

técnica empregada com o aspecto de saliva reagente,

como demonstra a ﬁgura 3.

Os tubos do tipo Falcon foram separados e identi-

ﬁcados. Também foi adicionado um tubo controle. Com

base nas instruções do kit colorimétrico, foram distribuí-

dos 0,5 mL do reagente Nº 1 em cada tubo, que foram

mantidos por dois minutos em banho-maria à 38,9°C. Ao

serem retirados do banho-maria, foram adicionados 10

µL de cada amostra em cada tubo. O controle não obteve

nenhuma adição. Em seguida foram homogeneizados

e mantidos em banho-maria por sete minutos e trinta

segundos a 38,9°C (Figura 2).

A análise da presença da atividade da enzima alfa-

-amilase salivar foi feita mediante a retirada dos tubos e

visualização macroscópica da coloração da amostra após

adicionar 0,5 mL do reagente Nº 2 e homogeneizar.