Genes 16S RNA ribossomal e pld como marcadores moleculares para identificação genotípica de amostras clínicas de Corynebacterium spp.

Authors

  • Alessandra Rejane Ericsson de Oliveira Xavier Unimontes
  • Angélica Alves de Moura Freitas Unimontes
  • Anna Christina de almeida UFMG
  • Vasco Ariston de Carvalho Azevedo UFMG
  • Igor Viana Brandi UFMG

Keywords:

Identificação genotípica, Corynebacterium, 16S rRNA, Fospolipase D.

Abstract

The genetic characterization of species is essential when you want to elect a vaccine strain or control the spread of outbreaks of a disease in a region. The 16S rRNA and pld Corynebacterium pseudotuberculosis genes play an important role as markers for bacterial genotype identification. The aim of this study was to validate an “in house” molecular methodology for genetic identification of Corynebacterium spp. isolated from clinical samples maintained in the laboratory. For this purpose, eleven isolates were reactivated in Brain Heart Infusion broth. The grown colonies identified as Gram-positive bacilli were submitted to chromosomal DNA extraction with KAPAExtract® kit according to manufacturer's recommendations. The extracted chromosomal DNA was quantified by 1.5% agarose gel electrophoresis and then subjected to duplex PCR with specific primers for the genus and species of Corynebacterium pseudotuberculosis. The amplicons generated were analyzed by 2.0% agarose gel electrophoresis. None of the isolated amplified the target genes for genus and specific species for those expected to be C. pseudotuberculosis. The positive control, C. pseudotuberculosis CIP102968 amplified fragments of 813 and 201 base pairs which corresponding to the 16S rRNA (genus specific) and pld genes (species specific) respectively. The negative control, Escherichia coli ATCC® 25922 do not amplified any target genes as expected. The results showed the need for improvement in the sampling techniques and previous microbiological identification preceding the molecular identification step and they are extremely important for precise genotype identification of strains of C. pseudotuberculosis.

Author Biography

  • Alessandra Rejane Ericsson de Oliveira Xavier, Unimontes

    Possui graduação em Ciências Biológicas pela Universidade Estadual de Goiás (1996), doutorado em Ciências Biológicas (ênfase em Biologia Molecular) pela Universidade de Brasília (2006) e pós- doutorado em Ciências Agrárias pela Universidade Federal de Minas Gerais (2015). Como bióloga atuou no Controle de Qualidade Microbiológico da Novo Nordisk Produção Farmacêutica do Brasil. Tem experiência na área de Microbiologia, com ênfase em Microbiologia Aplicada à Indústria Farmacêutica, atuando principalmente nos seguintes temas: Validação de métodos analíticos microbiológicos, Escrita de procedimentos operacionais, Ministração de treinamentos em métodos analíticos microbiológicos, Qualificação de equipamentos de laboratório e Identificação de Micro-organismos por métodos tradicionais e rápidos. Possui experiência em docência no ensino superior (em metodologias tradicionais e ativas dentre as quais aprendizagem baseada em problemas), atuando principalmente em ensino e pesquisa nas áreas de Microbiologia e Biologia Molecular ou a ela relacionadas. Já foi membro do comitê de validação na Novo Nordisk, bem como diretora de pesquisa e membro do comitê de ética em pesquisa nas Faculdades Unidas do Norte de Minas. Desde 2007 atua como docente do curso de graduação em Medicina na Universidade Estadual de Montes Claros.A partir de 2011 tornou-se membro do corpo docente permanente do Mestrado Profissional em Biotecnologia da Universidade Estadual de Montes Claros onde além de orientar estudantes participa como professora das disciplinas: Biologia Molecular, Microbiologia Industrial, Qualidade no Segmento Biotecnógico e Tecnologia de Produção de Proteínas Recombinantes. Coordenadora do laboratório de ensino de MIcrobiologia - Unimontes

     

References

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Published

2016-08-31

Issue

Vol. 8 No. 2 (2016)

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How to Cite

Genes 16S RNA ribossomal e pld como marcadores moleculares para identificação genotípica de amostras clínicas de Corynebacterium spp. (2016). Agrarian Sciences Journal, 8(2), 23-29. https://periodicos.ufmg.br/index.php/ccaufmg/article/view/2907
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