Standardization of PCR and sequencing-based methods for the detection of the presence of CP4 EPSPS gene in Zea mays

Authors

DOI:

https://doi.org/10.35699/2447-6218.2020.19990

Keywords:

Genetically modified organisms, MON88017, Detection, Maize

Abstract

With the rise in planting of transgenic cultivars in Brazil as well as worldwide, the demand for legal regulations has increased. The transgenic event MON88017 is often found in maize cultivars marketed in Brazil. The event contains the CP4 EPSPS and cry3Bb1 genes, which encode tolerance to the herbicide glyphosate and resistance to caterpillars, respectively. Globally, methodologies to track transgenic events are mandatory. The objective of this study was to standardize a method based on qualitative PCR and sequencing for detection of the CP4 EPSPS gene in Zea mays. DNA was extracted from three commercial strains of transgenic maize, containing the MON88017 event, as well as conventional maize. Primers were designed for partial detection of the zein and CP4 EPSPS genes. PCR reactions were performed for detection of partial regions of CP4 EPSPS and Zein (as endogenous marker of Z. mays) genes. The three transgenic maize inbred lines tested positive for zein and CP4 EPSPS, and the two conventional strains tested negative for CP4 EPSPS and positive for the Zein gene. To confirm the presence of the genic regions, PCR products were sequenced and showed 100% identity with sequences of Zein and CP4 EPSPS genes deposited in GenBank. Thus, the results of this study suggest the applicability of an ‘in-house’ method for the qualitative detection of CP4 EPSPS in genetically modified maize cultivars.

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Author Biography

Alessandra Rejane Ericsson de Oliveira Xavier, State University of Montes Claros. Montes Claros, MG. Brazil.

Possui graduação em Ciências Biológicas pela Universidade Estadual de Goiás (1996), doutorado em Ciências Biológicas (ênfase em Biologia Molecular) pela Universidade de Brasília (2006) e pós- doutorado em Ciências Agrárias pela Universidade Federal de Minas Gerais (2015). Como bióloga atuou no Controle de Qualidade Microbiológico da Novo Nordisk Produção Farmacêutica do Brasil. Tem experiência na área de Microbiologia, com ênfase em Microbiologia Aplicada à Indústria Farmacêutica, atuando principalmente nos seguintes temas: Validação de métodos analíticos microbiológicos, Escrita de procedimentos operacionais, Ministração de treinamentos em métodos analíticos microbiológicos, Qualificação de equipamentos de laboratório e Identificação de Micro-organismos por métodos tradicionais e rápidos. Possui experiência em docência no ensino superior (em metodologias tradicionais e ativas dentre as quais aprendizagem baseada em problemas), atuando principalmente em ensino e pesquisa nas áreas de Microbiologia e Biologia Molecular ou a ela relacionadas. Já foi membro do comitê de validação na Novo Nordisk, bem como diretora de pesquisa e membro do comitê de ética em pesquisa nas Faculdades Unidas do Norte de Minas. Desde 2007 atua como docente do curso de graduação em Medicina na Universidade Estadual de Montes Claros.A partir de 2011 tornou-se membro do corpo docente permanente do Mestrado Profissional em Biotecnologia da Universidade Estadual de Montes Claros onde além de orientar estudantes participa como professora das disciplinas: Biologia Molecular, Microbiologia Industrial, Qualidade no Segmento Biotecnógico e Tecnologia de Produção de Proteínas Recombinantes. Coordenadora do laboratório de ensino de MIcrobiologia - Unimontes

 

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Published

2020-05-02

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Cangussu, C. H. C., Cardoso, L., Xavier, A. R. E. de O., Santos, J. dos, Campos, L. F. L. ., Brandão, M. M., Garcia, D. C. F., Oliveira, A. M. E. de, Rossi, E. S., & Xavier, M. A. de S. . (2020). Standardization of PCR and sequencing-based methods for the detection of the presence of CP4 EPSPS gene in Zea mays. Agrarian Sciences Journal, 12, 1–9. https://doi.org/10.35699/2447-6218.2020.19990

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Vol. 12 (2020)

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